据说如果喝下耶稣在最后的晚餐中使用的圣杯中的水，就可以长生不老。在一次淘金活动中，发现了记录圣杯的石碑。圣杯存在的可能性，吸引了大批疯狂的人去寻找。印第安纳·琼斯博士（哈里森·福特HarrisonFord饰）就是其中之一，就连他的父亲老琼斯（肖恩·康纳利SeanConnery饰）也被卷入其中——但他给琼斯留下了一张圣杯纸条，然后就消失了。踏上威尼斯的土地，琼斯会见了事先约好的史奈德博士（艾莉森·杜迪AlisonDoody饰）。他们在图书馆找到有线索的圣盾后，开始遭到十字剑的莫名兄弟的追杀。几经周折，琼斯终于找到了老琼斯。与此同时，斯奈德的纳粹身份被曝光，笔记被带走。圣杯随时都有可能落入纳粹手中。于是，琼斯父子开始了一起上演拯救圣杯的精彩大戏！
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